LED (LAJU ANDAP DARAH)

METODE         : Wintrobe

PRINSIP         : Darah anticoagulant dibiarkan di dlm pipet dg ukuran tertentu dg posisi tegak lurus, kecepatan eritrosit mengendap di ukur dlm jangka waktu tertentu.

PROSEDUR    :

Pipet NaCl 0,85% – 0,9% (PZ) 0,25 ml ked lm tabung pencampur à dipipet darah anticoagulant (EDTA 10%) 1 ml à dicampur à campuran dipipet dg pipet LED tepat sampai tanda 0 à bagian luar pipet dibersihkan à memasang pipet LED pada rak dg posisi tegak lurus à ditunggu selama 1 jam à mencatat penurunan darah (panjang plasma)

NILAI NORMAL

·   Laki – laki           : 0 – 9 mm/jam

·   Perempuan       : 0 – 20 mm/jam

MATERI          :

Istilah lain untuk LED

·   ESR      : Erythrosit Sedimentation Rate

·   BBS     : Blood Bzinking Snellyhyd

LED adalah kecepatan mengendapnya sel – sel darah dari suatu sampel darah yg diperiksa dlm suatu alat dg satuan mm/jam.

PZ : Darah = 1 : 4

PEMERIKSAAN HAEMOGLOBIN (Hb)

1. CARA SAHLI

Prinsip        : Darah + HCL 0,1N menjadi asam hematin yg berwarna kecoklatan. Warna ini diencerkan dlm tabung berskala sampai warnanya sama dg warna pembanding. Tinggi miniskus pada skala menunjukkan kadar Hb dlm satuan gr% (gr/dL).

Prosedur   :

a.  Meneteskan HCL 0,1N ked lm tabung hemoglobin sampai tanda 2,0.

b. Menghomogenkan sampel (darah + antikoagulant) à dihisap dg pipet hemoglobin sampai tanda 20 mm³ (0,02 ml).

c.  Dimasukkan ked lm tabung hemoglobin yg sudah berisi HCL 0,1N (bagian luar pipet harus bersih).

d. Tabung dikocok perlahan agar homogeny tanpa ada buih.

e. Waran yg terbentuk disamakan dg standart dg menambahkan aquadest.

f.   Membaca miniskus dg latar belakang cahaya yg terang.

2. CYANMETHEMOGLOBIN

Prinsip        : Ferri cyanida dlm larutan Drabkins mengubah besi hemoglobin dari bentuk ferro menjadi cyanmethemoglobin yg berwarna stabil. Intensitas warna diukur pada fotometer panjang gelombang 540 nm, maka O.D (absorban) imbang dg konsentrasi hemoglobin.

Prosedur   :

a.  Mengisi 2 buah tabung reaksi (Untuk Balnko dan Test) dg larutan Drabkins @ 5 ml.

b. Menghomenkkan sampel à memipet sampel sebanyak 20 mm³ dg pipet Hb ( 20 µl dg mikropipet).

c.  Tabung dikocok sampai homogen tanpa menimbulkan buih à ditutup dg parafilm à inkubasi pada suhu kamar selama 10 menit

d. Memanaskan spektrofotometer, atur pada λ = 540 nm.

e. Melakukan pembacaan pada spektrofotometer.

·   Memindahkan Blanko pada kuvet à baca pada spektofotometer untuk menentukan titik 0 nya.

·   Membaca abs standart Hb yg sudah diketahui kadarnya.

·   Test dipindahkan pada kuvet à  baca abs test pada spektrofotometer

Perhitungan

Kadar Hb = Abs Test    x  kadar Hb standart

                          Abs Std

Nilai Normal     :

·   Laki – laki           : 14 – 17 gr/dL

·   Perempuan       : 12 – 15 gr/dL

PENGENCERAN ERITROSIT

PRINSIP : jml sel dlm 1 mm³ darah dpt dihitung dg jalan mengencerkan dg larutan tertentu dan berdasarkan volume darah yg sudah diencerkan ini dihitung dlm KH.

ALAT & BAHAN

·   Pipet Thoma eritrosit (skala 0 – 101)

·   Larutan Hayem

PROSEDUR

a.  Menghomogenkan specimen à dipipet dg pipet thoma eritrosit sampai tanda 0,5 (dilebihkan, bagian luar dibersihkan, ditepatkan tanda 0,5)

b. Pemipetan dilanjutkan dg larutan pengencer Hayem sampai tanda 101.

c.  Dihomogenkan dg arah sejajar vertical selama 2 – 3 menit (gerakan ke atas – ke bawah)

d. Menyiapkan kamar hitung dan memasang cover glass pd kamar hitung.

e. Pipet thoma yg sudah berisi pengenceran dihomogenkan kembali à larutan dibuang 3 – 4 tetes.

f.   Bagian luar pipet dibersihkan à larutan diteteskan di ruang kamar hitung (harus memenuhi ruangan dan tdk tumpah ke parit)

g.  Melihat di bawah mikroskop dg perbesaran lensa obyektif 10x dan 40x

h. Menghitung jml eritrosit dlm 5 kotak eritrosit.

RUMUS  :

∑ Eritosit    = 1/Vol KH  x  1/CB x jml eri dlm KH (390 - 490)

                    = 10.000 x jml eri dlm KH              

Vol Kamar Hitung                 : 1/50 mm³

Consentrasi Bahan               : 1/200

Nilai Normal    :

Laki – laki           : 4,2 – 5,4 juta/mm³ darah

Perempuan       : 3,6 – 5,0 juta/ mm³ darah

PENGENCERAN LEUKOSIT

PRINSIP         : Jml sel dlm 1 mm³ darah dpt dihitung dg jln mengencerkan dg larutan tertentu dan berdasarkan volume darah yg sudah diencerkan ini dihitung dlm kamar hitung.

ALAT & BAHAN

·   Pipet Thoma Leukosit (skala 0 – 11,0)

·   Larutan pengencer Turk

PROSEDUR    :

a.  Menghomogenkan specimen à dipipet dg pipet thoma leukosit sampai tanda 0,5 (dilebihkan, bagian luar dibersihkan, ditepatkan tanda 0,5)

b. Pemipetan dilanjutkan dg larutan pengencer Turk sampai tanda 11.

c.  Dihomogenkan dg arah sejajar vertical selama 2 – 3 menit (gerakan ke atas – ke bawah)

d. Menyiapkan kamar hitung dan memasang cover glass pd kamar hitung.

e. Pipet thoma yg sudah berisi pengenceran dihomogenkan kembali à larutan dibuang 3 – 4 tetes.

f.   Bagian luar pipet dibersihkan à larutan diteteskan di ruang kamar hitung (harus memenuhi ruangan dan tdk tumpah ke parit)

g.  Melihat di bawah mikroskop dg perbesaran lensa obyektif 10x dan 40x

h. Menghitung jml leukosit dlm 4 kotak leukosit.

RUMUS  :

∑ Leukosit    = 1/Vol KH x 1/CB x jml leko dlm KH (80 - 200)

                      = 50 x jml leko dlm KH

Vol Kamar Hitung                 : 4/10 mm³

Consentrasi Bahan               : 1/20

Nilai Normal    :

∑ leukosit = 4000 – 10.000/mm³ darah

HITUNG TROMBOSIT

1. CARA LANGSUNG

Metode             : Ress & Ecker

Prinsip                : darah diencerkan dg larutan yg mengandung Brilliant Creasyl Blue (BCB) sehingga trombosit berwarna biru cerah. Perhitungan didasarkan pd pengenceran dan volume cairan dlm KH.

Alat & Bahan     :

·   Pipet pengencer eritrosit (skala 0 – 101)

·   Larutan pengencer Ress & Ecker

Prosedur           :

a.  Menghomogenkan specimen ± 2 menit (agar trombo tdk menggerombol) à specimen dihisap sampai tanda 0,5 (dilebihkan, bagian luar dibersihkan, ditepatkan tanda 0,5).

b. Pemipetan dilanjutkan dg larutan pengencer sampai tanda 101

c.  Pipet dikocok selama 2 – 3 menit agar larutan di dlmnya homogen.

d. Menyiapkan kamar hitung dan memasang cover glass pd kamar hitung dan ruang lembab untuk KH.

e. Pipet thoma yg sudah berisi pengenceran dihomogenkan kembali à larutan dibuang 4 – 5 tetes.

f.   Bagian luar pipet dibersihkan à larutan diteteskan di ruang kamar hitung (harus memenuhi ruangan dan tdk tumpah ke parit)

g.  Menempatkan kamar hitung tsb dlm ruang lembab yg sudah disiapkan à inkubasi 15 menit (agar trombosit mapan)

h. Melihat di bawah mikroskop dg perbesaran lensa obyektif 40x dan 10x

i.   Menghitung jml trombo dlm 4 kotak leukosit (300 - 700)

Rumus                :

∑ Trombosit   = 1/Vol KH x 1/CB x jml trombo dlm KH

                        = 500  x  jml trombo dlm KH

Vol Kamar Hitung             : 4/10 mm³

Consentrasi Bahan           : 1/200

Nilai Normal                :

∑ leukosit = 150.000 – 350.000/mm³ darah

2. CARA TIDAK LANGSUNG

Metode             : hapusan darah

Prosedur           :

Darah dibuat hapusan à diwarnai dg Giemsa à dihitung trombositnya sampai jml eri 1000.

LP Ke	∑ Trombo	∑ Eri
1
2
3
4
JML	misal : 53	1000 atau lbh sdkt

Trombo = ∑ Trombosit  x  ∑ Eritrosit dlm KH

                  ∑ Eri (1000)

HITUNG EOSINOFIL

PRINSIP             : Eosinofil dihitung tersendiri dg larutan pengencer yg dpt mewarnai eosinofil tetapi sel – sel leukosit yg lain serta eritrosit lisis. Perhitungan didasarkan atas penipisan dan volume cairan dlm KH.

ALAT & BAHAN

·   Pipet pengencer leukosit (skala 0 – 11)

·   Larutan pengencer Dungern

PROSEDUR        :

a.  Menghomogenkan specimen à specimen dihisap sampai tanda 1 (dilebihkan, bagian luar dibersihkan, ditepatkan tanda 1).

b. Pemipetan dilanjutkan dg larutan pengencer sampai tanda 11.

c.  Pipet dikocok selama 2 – 3 menit agar larutan di dlmnya homogen.

d. Menyiapkan kamar hitung dan memasang cover glass pd kamar hitung dan ruang lembab untuk KH.

e. Pipet thoma yg sudah berisi pengenceran dihomogenkan kembali à larutan dibuang 4 – 5 tetes.

f.   Bagian luar pipet dibersihkan à larutan diteteskan di ruang kamar hitung (harus memenuhi ruangan dan tdk tumpah ke parit)

g.  Menempatkan kamar hitung tsb dlm ruang lembab yg sudah disiapkan à inkubasi 15 menit

h. Melihat di bawah mikroskop dg perbesaran lensa obyektif 10x

i.   Menghitung jml eosinofil pada 9 petak KH (seluruh KH).

(±15)

RUMUS                :

∑ Eosinofil  = 1/Vol KH x 1/CB x jml Eosinofil dlm KH

                = 100/9 x  jml Eosinofil dlm KH

NILAI NORMAL    :

∑ Eosinofil = 150 – 300/mm³ darah

HITUNG RETIKULOSIT

PRINSIP               : Prosentase retikulosit terhadap seluruh eritrosit yg beredar dlm sirkulasi darah dihitung dg melihat tanda² khusus berupa benang² filamen sisa² RNA yg dpt terlihat melalui pewarnaan supravital (pewarnaan terhadap eritrosit dlm keadaan utuh dan segar)

ALAT & BAHAN  :

·   Pewarna : larutan BCB (Briliant Cresyl Blue)

PROSEDUR          :

a.  Membuat campuran antara larutan BCB dan specimen (1 : 1) dalam tabung kecil à dihomogenkan.

b. Inkubasi pada suhu kamar selama 15 menit (pewarnaan supravital berlangsung).

c.  Campuran dihomogenkan kembali à dibuat hapusan à hapusan dikeringkan.

d. Diperiksa di bawah mikroskop perbesaran lensa obyektif 100x à diamati hingga eritosit mencapai 1000

NILAI NORMAL    :

∑ Retikulosit = 8 – 15 % (0,8 – 15 ‰)

LP	RETI	ERI	JML
1	1	200	201
2	2	200	403
3
4
JML	∑ = 5	∑ = 1000	∑ =

HITUNG JENIS LEUKOSIT

METODE         : Hapusan darah

PROSEDUR    :

a.  Membuat hapusan darah yg baik (panjang 3/4 dari obyek glass, mempunyai daerah tebal dan tipis) à hapusan dikeringkan.

b. Diwarnai dg pewarna Giemsa siap pakai.

-    Sediaan difiksir (digenangi) dg alcohol 96% selama 1 – 2 menit à genangan dibuang.

-    Digenangi dg Giemsa siap pakai (capuran Giemsa induk & Buffer phospat à 3 tetes atau 0,15 ml : 1 ml) selama 20 – 40 menit à genangan dibuang à dibilas dg air mengalir

-    Sediaan dikeringkan.

c.  Sediaan dilihat di bwh mikroskop perbesaran lensa obyektif 100x.

d. Menghitung setiap leukosit yg dijumpai dan mengidentifikasi jenisnya.

	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	JML
Eos
Baso
Stab
Seg
Lim
Mono
	10	10	10	10	10	10	10	10	10	10	100

NILAI NORMAL    :

·   Eosinofil             : 1 – 3 %

·   Basofil                : 0 – 1 %

·   Stab                    : 2 – 4 %

·   Segment            : 50 – 65 %

·   Limfosit              : 26 – 40 %

·   Monosit             : 4 – 10 %

JENIS² LEUKOSIT

1. EOSINOFIL

-    Granula padat, kasar, dan berwarna merah, hanya ada pada sitoplasma.

-    Inti di tengah, biasanya terdiri dari 2 lobus.

-    Bersifat basa à menyerap zat asam

    

2. BASOFIL

-    Granula lebih kasar (ukuran tdk teratur), berwarna biru, terletak pada sitoplasma dan inti (bahkan bisa menutupi inti).

-    Inti umumnya tidak bersegmen

-    Bersifat asam à menyerap zat basa

   

3. STAB

-    Granula berwarna ungu dan halus

-    Intinya merupakan satu bagian yg sama (lekukan tidak lebih dari 1/3)

 

4. SEGMEN

-    Granula kecil, halus dan berwarna ungu

-    Inti umumnya terdiri dari 3 – 8 lobus (kadang terpecah)

5. LIMFOSIT

-    Tidak bergranula (agranulosit)

-    Inti hampir memenuhi sel, berbentuk bulat dan padat

     

6. MONOSIT

-    Tidak bergranula (agranulosit)

-    Inti berbentuk seperti otak atau lipatan handuk, dan tidak padat

-    Merupakan sel yg paling besar diantara yg lainnya.

    

EVALUASI HAPUSAN DARAH (EHD)

1. ERITROSIT

Warna        : Hipokrom (Hb ↓), Normokrom

Ukuran       : Mikrositer, Makrositer, Normositer

Bentuk       : Teardrop, Sickle cell, Burr cell, Acanthosyt (sprit bntang), Cigar cell

Nama sel ini dapat digunakan untuk menunjukkan jenis anemia.

·   Kelainan bentuk   : Poikilosytosis

·   Kelainan ukuran   : Anisocytosis

·   Kelainan jml chromatosin : Polychromatosin

                                             Target cell

       

                                            Sikcle cell                             

    

        Krenasi                                       Acantocyt

   

        Tear Drob cell                           Agllutinasi

           

                                    Poikilocytosis

 

                                    Anisocytosis

  

            Hipokrom                              Burr cell

 

                                    Retikulosit

2. LEUKOSIT

Kesan jumlah    : meningkat, menurun, normal

Sel muda            : ada atau tidak

Sel muda harus ditantukan dg benar jenisnya à untuk mengetahui jenis leukimianya

Leukimia            :

a.  Akut

AML    à Akut Meyloblast Leukemi

ALL     à Akut Limfoblast Leukemi

b. Kronis

CML    à Cronic Meyloblast Leukemi

CLL      à Cronic Limfoblast Leukemi

Cara membedakan

·   Akut à didomonasi oleh sel muda

Cara membedakan sel muda dilihat dari sel matang yg ada disekitar sel muda.

-    jika banyak limfosit maka ALL

-    jika banyak segmen atau stab maka AML

Semakin muda sel à ukuran semakin besar dan inti tdk jelas, kromatin tdk padat.

Adanya sel muda tdk dapat dilakukan diff count tetapi EHD.

·   Kronis à didominasi sel matang

Jml leukosit normal  0 – 4 /LP

Jika Leukemia pasti Lekositosis

Jika Lekositosis belum pasti Leukimia

Beda : jika ada sel muda = leukemia, jika tdk ada = lekositosis

Lekopenia à kekurangan leukosit

Lekositosis à meningkatnya jml leukosit

Leukimia à leukosit yg tdk terhingga

                LE cell

3. TROMBOSIT

Kesan jumlah    : meningkat, menurun, normal(8–15/LP)

Bentuk               :

·   Giant  à ukuran besar, hampir sama dg eri/limfo kecil.

·   Lunch à ada serabut

Trombosit

                                             Giant

 

CATATAN           :

·   LE (Lupus Eritomatosis)

Yaitu leukosit yg dimakan leukosit lain.

Kelainan cairan plasma di tubuh seseorang karena suatu factor.

·   Talasemia à ada target cell, eritosit pucat

·   Eosinofil à menanggulangi infeksi parasit, alergi dan menetralkan racun.

·   Basofil à mengandung heparin sehingga berperan dalam pembekuan darah.

·   Neutrofil à infeksi bakteri

·   Lymfosit à infeksi virus, pembentukan antibody

·   Monosit à memakan sisa-sisa jaringan (fagositosis), bersembunyi dalam system pertahanan tubuh.

Fdaktor Yang Mempengaruhi Hasil LED:

·       Eritrosit :

Semakin besar, meluncur cepat à LED tinggi

Jumlah tinggi à LED rendah

·       Massa jenis ↑ à LED tinggi

Anemia Berdasarkan Ciri Ukuran dan Warna:

·       Defisiensi asam folat dan Vit. B12 à Makrositik dan Hipokrom

·       Defisiensi Besi à mikrositik dan hipokrom