PEMERIKSAAN URINE

1. MAKROSKOPIS

-    Warna                            - Bau

-    Busa                                - Kejernihan

-    Ph   (normal : 5,0 – 7,0)

2. KIMIAWI

a. Albumin

Metode     :Test rebus As Asetat 6%

Prinsip        : albumin (protein) akan mengendap pada suasana asam dan panas.

Prosedur   :

Ø Urine dihomogenkan à ± 10 ml dituang ke tabung sentifuge

Ø Sentrifuge urine 1500 rpm selama 5 menit à supernatant dan endapan dipisahkan

Ø Supernatan dituang dlm 2 tabung reaksi

Tabung blanko dan tes

Ø Tabung tes dipanaskan sampai mendidih à bila terjadi kekeruhan ditambah 2 – 3 tetes asam asetat 6%

Jika kekeruhan tetap : kekeruhan karena albumin

Jika kekeruhan hilang : kekeruhan karena fosfat dan karbonat

Metode         : Test Asam Sulfosalisilat 20%

Prinsip            : Albumin (protein) akan mengendap dg penambahan asam.

Prosedur       :

Ø Urine dihomogenkan à ± 10 ml dituang ke tabung sentifuge

Ø Sentrifuge urine 1500 rpm selama 5 menit à supernatant dan endapan dipisahkan

Ø Supernatan dituang dlm 2 tabung reaksi

Tabung blanko dan tes

Pada tabung tes ditambah beberapa tetes Asam sulfosalisilat 20% à homogenkan

Bila terjadi kekeruhan maka urine positif albumin.

Nilai normal   :

(-) Neg            : tidak ada kekeruhan

(+) Pos 1        : ada kekeruhan ringan tanpa butir²

(++) Pos 2      : kekeruhan dpt dilihat, ada butir²

(+++) Pos 3    : jelas keruh, kekeruhan berkeping²

(++++) Pos 4 : sangat keruh, berkepingbesar, memadat

b. Reduksi

Metode         : Test Benedict

Prinsip            : Glukosa akan mereduksi CuSo₄ (biru) menjadi oksidasi cupro (merah) dlm keadaan panas.

Prosedur       :

Ø Pipet 5 ml pereaksi Benedict, masukkan tabung reaksi besar

Ø Tambah dg 5 – 8 tetes urine (urine dihomogenkan dulu)

Ø Dipanaskan à mengamati perubahan yg terjadi

Nilai normal   :

(-) Neg            : warna biru

(±) Trace        : warna hijau

(+) Pos 1        : warna hijau, endapan kuning

(++) Pos 2      : warna kuning sampai hijau tua

(+++) Pos 3    : warna coklat

(++++) Pos 4 : warna jingga sampai merah bata

Metode         : Test Fehling

Prinsip            : Reduksi larutan tembaga alkali (biru) menjadi oksidasi cupro (merah) pada suasana panas

Prosedur       :

Ø Pipet Fehling A dan Fehling B (1 : 1) à dimasukkan dlm tabung reaksi besar

Ø Pipet 0,5 ml urine (urin dihomogenkan dulu) à dimasukkan dlm tabung tsb

Ø Tabung dipanaskan sampai mendidih.

Nilai normal   :

(-) Neg            : warna biru jernih

(+) Pos 1        : warna hijau kekuningan dan keruh

(++) Pos 2      : warna kuning keruh

(+++) Pos 3    : warna jingga keruh

(++++) Pos 4 : warna merah keruh

c.  Bilirubin

Metode          : Test dari Horrison

Prinsip            : Adanya bilirubin dlm urine akan dioksidasi oleh reagen Fauchet yg berwarna hijau, dimana sebelumnya bilirubin diendapkan oleh BaCl₂.

Prosedur       :

Ø Urine dihomogenkan à dipipet 5 ml, masukkan tabung reaksi

Ø Ditambah 2,5 ml larutan BaCl₂ 10% à homogenkan

Ø Endapan yg terbentuk disaring dg kertas saring à kertas saring yg berisi residu dipindahkan ke petridish

Ø Pada kertas saring ditetesi 1 – 2 tetes pereaksi Fouchet

Nilai normal   :

(-) Neg            : tidak terjadi perubahan warna pd endapan

(+) Pos            : tampak warna hijau pd endapan

d. Urobili

Metode          : Test menurut Schlesinger

Prinsip            : Iodium mengoksidir urobilinogen menjadi urobilin yg bereaksi dg ion zink membentuk ikatan komplek yg berpendar hijau.

Prosedur       :

Ø Urine dihomogenkan à dipipet 5 ml à ditambah 3 – 3 tetes lugol

Ø Ditambah 10 ml pereaksi Schlesinger à homogenkan

Ø Larutan disaring à filtrate diamati dg latar belakang gelap.

Nilai normal   :

(-) Neg            : warna filtrate kuning jernih

(+) Pos            : warna filtrate berpendar hijau

Urobilin (+) belum tentu krn kelainan, bisa pengaruh obat.

3. SEDIMENT URINE

Metode              : Direct

Prinsip                : Urine disentrifuge, endapan dibuat preparat dan dilihat dibawah mikroskop.

Prosedur           :

Ø Urin dihomogenkan à dituang ± 10 ml (10 – 15 ml) ke dlm tabung sentifuge

Ø Urine dusentrifuge 1500 – 2000 rpm selama 5 menit

Ø Dipisahkan sedimen dari supernatannya

Ø Dibuat preparat

Sediment dihomogenkan à diambil dg pipet Pasteur à diletakkan pd objek glass à dititip cover glass.

Ø Diamati dg mikroskop perbesaran lensa objektif 10x (mencari LP dan identifikasi kristal) kemudian 40x (identifikasi).

Jenis	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	Jml	Range
Eritrosit
Leukosit
Epitel
Kristal
Silinder
Lain2

   Bakteri   : (+/-)

Yeast      : (+/-)

Parasit   : (+/-)

                       

Ca Oksalat                   Leukosit          Hyalin          Squamus Epitel

        

 Amorph

 

Epitel      : - Squamust

-    Transisional (panjang)

-    Renal (ukuran hamper sama dg leukosit tp lebih besar)

Amorph : Urat dan Phosphat

4. CARIK CELUP

Metode              : Carik celup

Prinsip                : Urine diperiksa dg menggunakan reagent strip

Prosedur           :

Ø Urin dihomogenkan à dituang ke tabung reasi besar

Ø Carik dicelupkan sebantar à ditiriskan di tepi tabing à ditiriskan pada tissue

Ø Warna dicocokkan dg standart pada botolnya (1-2 mnt)

CATATAN

Dasar pengukuran photometer 4010

a) End Point

Ciri :    -   Enzymatic colorimetrik

-    λ visible,

-    harus ada Blank, Std, dan Test

-    memerlukan waktu inkubasi lama

Untuk : Glu, Urea, UA, TP, Alb, Chol, TG

b) End Point – SB

Blank berisi sampel (yg membedakan reagen nitrit)

Untuk : Bilirubin

c) Kinetik

Dibaca berulang – ulang dan diambil rata –ratanya.

Ciri :    -   hanya butuh 1 tabung (test)

-    Larutan tidak berwarna

-    λ UV

-    Inkubasi tidak lam, max 1 menit

Untuk : SGOT, SGPT, ALP, LDH, CKMB, γ GT

d) Fix Time

Disebut juga Two point kinetic

-    Fix time

Cara pembacaan dibaca 2x diambil selisih, λ UV

Untuk : Urea UV

-    Fix Time non UV

Λ visible

Untuk : kreatinin

Pembacaan Bilirubin pada 4010

Program Abs, F = 0, λ disesuaikan

Nyalakan PUM à bilas kuvet dg aquadest à kosongkan

Masukkan SB à takan zero, muncul 0,000 à kosongkan

Bilas aquadest à kosongkan

Masukkan Sampel à tekan result, muncul abs test à kosongkan à bilas aquadest à kosongkan

Program C/F, F = dimasukkan, λ disesuaikan

Masukkan SB à tekan zero, muncul 0,000 à kosongkan

Bilas aquadest à kosongkan

Masukkan sampel à tekan result, muncul Hasil test à Kosongkan à bilas aquadest à kosongkan

Membaca Kreatinin pada 4010

Blank : aquadest

WR + STD/Sample à masuk kuvet à stopwatch nyala à 30 detik tekan zerro, muncul 0,0000 à setelah 2 menit à tekan result, muncul ∆ abs

Panjang gelombang

UV                           : 340 – 405 nm

Visibel                    : 492 – 600 nm

Irreversibel           : > 700 nm

GLUKOSA DARAH

METODE     : GOD – PAP without deproteinasi

PRINSIP      : Gukosa ditetapkan setelah oksidasi enzimatik menghasilkan glukosa oksidasi. Terbentuk oksigen peroxide bereaksi dibeh katalis peroxide dg phenol dan 4-aminophenazone berwarna merah ungu (quinoneimine) sbg indicator.

	TEST	STD	BL
Serum	10 µl	-	-
Std	-	10 µl	-
Reagen warna	1000 µl	1000 µl	1000 µl
Campur, inkubasi 10 menit pd suhu 20 - 25◦C atau 5 menit pd suhu 37◦C Baca pada photometer 4010, λ = 546 nm (toleransi 60 mnit)

Reaksi                             :

Glu + O₂ + H₂O  ^GOD      Glukonoc acid + H₂O₂

2H₂O₂ + 4-aminophnenazone + phenol   ^PAP      quinoneamine + 4H₂O

Dasar pengukuran: End Point

Warna                    : pink

Nilai normal           : 75 – 115 mg/dL

Glukosa =   Abs Test  x  C. std (100 mg/dL)

                    Abs Std

METODE     : GOD – PAP with deproteinasi

	TEST	STD	BL
Aquadest	500 µl	500 µl	-
Std	-	50 µl	-
TCA 8 – 10 %	500 µl	500 µl	-
Whole bood (NaF)	50 µl
Campur, sentifuge dg kecepatan 3000 rpm selama 10 menit
Supernatan	100 µl	100 µl
Reagen warna	1000 µl	1000 µl	1000 µl
Campur, inkubasi 25 menit pd suhu 20 - 25◦C atau 10menit pd suhu 37◦C Baca pada photometer 4010, λ = 546 nm (toleransi 60 mnit)

RENAL FUNGTION TEST (RFT)

1. UREA

Metode    : Barthelot

Prinsip      : Urea dihidrolisis dlm campuran air dan urease untuk menghasilkan ammonia dan karbondioksida pd reaksi modifikasi Barthelot ammonium bereaksi dg hipoklorid dan salisilat untuk membentuk warna hijau.

	BL	TEST
Serum	-	10 µl
Reagen enzim (1 ml enzim + 100 R1)	1000 µl	1000 µl
Campur, inkubasi 5 mnit pd 20 - 25◦C atau 3 mnit pd 37◦C
R2	1000 µl	1000 µl
Campur, inkubasi 10 menit pd 25◦C atau 5menit pd 37◦C. Baca pada photometer 4010, λ = 546 nm, factor = 80 mg/dL (toleransi 60 mnit)

Dasar pengukuran   : End Point

Warna                        : Hijau

Nilai normal               : Urea = 10 – 50 mg/dL

                                      BUN  = 10 – 20 mg/dL

Urea = Abs Test  x Faktor

BUN = Urea

             2,14

2. ASAM URAT

Metode    : PAP anzymatic colorimetrik

Prinsip      : Pemeriksaan UA dg reaksi uriase. Hydrogen peroxide bereaksi dibwh katalis dari peroxide dg asam 3,5-dikloro-2-hydrobenzesulfonic (DCHBS) dan 4-amino phenazone (PA) untuk member warna violet quinoimine sebagai indicator.

	TEST	STD	BL
Serum	20 µl	-	-
Std	-	20 µl	-
Reagen warna	1000 µl	1000 µl	1000 µl
Campur, inkubasi 10 menit pd suhu 20 - 25◦C atau 5 menit pd suhu 37◦C Baca pada photometer 4010, λ = 546 nm (toleransi 15 mnit)

Reaksi                         :

UA + O₂ + 2H₂O  ^uricase      alantoin + CO₂ + H₂O₂

4H₂O₂ + DCHBS + PAP ^peroksidase      quinoneamine + HCl  + 4H₂O

Dasar pengukuran   : End Point

Warna                        : Pink

NIlai normal               : L = 3,4 – 7,0 mg/dL

                                      P = 2,4 – 6,7 mg/dL

UA = Abs Test  x  C. std (8 mg/dL)

               Abs Std

3. KREATININ

Metode    : Jafee without deproteinasi

Prinsip      : Kreatinin terbentuk dlm larutan bersuasana alkali berwarna merah orange kompleks dg asam pikrat. Abs kompleks ini sebanding dg konsentrasi kreatinin dlm sampel.

	STD	TEST
Serum	-	100 µl
STD	100 µl	-
Working Reagen (WR) (NaOH encer : asam pikrat à 1:1) (NaOH enceràNaOH : Aquadest 1:4)	1000 µl	1000 µl
Photometer 4020 Campur, Baca pada photometer 4020, λ = 546 nm.
Photometer 4010  (program Abs, λ = 546 nm) Nyalakan stopwatch tepat setelah penambahan sampel dlm WR, campur dan masukkan ke kuvet photometer 4010 Tepat setelah 30 detik à tekan zero pd photometer 4010. Stopwatch dilanjutkan sampai 2 menit lg à tekan Result. Hasil adalah ∆ Abs.

Reaksi                         :

Kreatinin + As pikrat à Kreatinin – pikrat kompleks

Dasar pengukuran   : Fix time non UV

Warna                        : Kuning

NIlai normal               : L = 0,6 – 1,1 mg/dL

                                      P = 0,5 – 0,9 mg/dL

Kreat = ∆ Abs test  x  C. std (2 mg/dL)

                  Abs std

LIVER FUNGTION TEST (LFT)

1. SGOT (Serum Glutamic Oksaloasetik Transaminase)

ASAT (Aspartat Aminotransferase)

Metode      : Kinetik

Prinsip        : Metode kinetic untuk determinasi Aspartat Aminotranferase (ASAT) sesuai dg rekomendasi Expert Panel IFCC tanpa aktivasi pyridoxaphosphate.

	TEST
Serum	200 µl
Working Reagen (WR) 2 ml Substrat dlm 1 botol Buffer	1000 µl
Photometer 4020 Pipet 200 µl sampel dan langsung dimasukkan pd tabung yg sebelumnya sudah berisi 1000 µl WR Campur, baca pd photometer 4020, λ = 340 nm, F = 952 atau 1745
Photometer 4010 Campur, inkubasi 1 menit Baca pd photometer program K20, λ = 340 nm, F = 952 atau 1745

Dasar pengukuran       : kinetic

Warna                            : tidak berwarna

Nilai normal                   :

	25◦C (952)	30◦C (1746)
Laki – laki	≥ 18 U/l	≥ 25 U/l
Perempuan	≥ 15 U/l	≥ 21 U/l

2. SGPT (Serum Glutamic Piruvilic Transaminase)

ALAT (Alanin Aminotransferase)

Metode      : Kinetik

Prinsip        : Metode kinetic untuk determinasi Alanin Aminotranferase (ALAT) sesuai dg rekomendasi Expert Panel IFCC tanpa aktivasi pyridoxaphosphate.

	TEST
Serum	200 µl
Working Reagen (WR) 2 ml Substrat dlm 1 botol Buffer	1000 µl
Photometer 4020 Pipet 200 µl sampel dan langsung dimasukkan pd tabung yg sebelumnya sudah berisi 1000 µl WR Campur, baca pd photometer 4020, λ = 340 nm, F = 952 atau 1745
Photometer 4010 Campur, inkubasi 1 menit Baca pd photometer program K20, λ = 340 nm, F = 952 atau 1745

Dasar pengukuran       : kinetic

Warna                            : tidak berwarna

Nilai normal                   :

	25◦C (952)	30◦C (1746)
Laki – laki	≥ 22 U/l	≥ 30 U/l
Perempuan	≥ 17 U/l	≥ 23 U/l

3. ALP (Alkali Phosphatase)

        Metode          : Kinetik

	TEST
Serum	20 µl
Working Reagen (WR) 2 ml Substrat dlm 1 botol Buffer	1000 µl
Campur, inkubasi 1 menit Baca pd photometer 4010 program K20, λ = 340 nm, F = 2757

        Dasar pengukuran       : kinetic

        Warna                            : tidak berwarna

        Nilai normal                   :

	25◦C (952)	30◦C (1746)
Laki – laki	50 – 190 U/l	61 - 232 U/l
Perempuan	40 - 190 U/l	49 - 232 U/l

4. Total Protein

Metode      : Biuret

Prinsip        : Ion cupri bereaksi dg protein dlm larutan alkali membentuk kompleks warna ungu.

	TEST	STD	BL
Serum	20 µl	-	-
Std	-	20 µl	-
Reagen warna	1000 µl	1000 µl	1000 µl
Campur, inkubasi 10 menit pd suhu 20 - 25◦C atau 5 menit pd suhu 37◦C Baca pada photometer 4010, λ = 546 nm (toleransi 30 menit)

Dasar pengukuran       : End Point

Warna                            : Ungu (std : biru)

Nilai normal                   : 6,6 – 8,7 g/dL

TP = Abs Test  x  C. std (8 g/dL)

          Abs Std

5. ALBUMIN

Metode          : Bromcresol Green (BCG)

Prinsip            : BCG dg albumin dlm buffer citrate membentuk warna kompleks.

	TEST	STD	BL
Serum	10 µl	-	-
Std	-	10 µl	-
Reagen warna	1000 µl	1000 µl	1000 µl
Campur, inkubasi 10 menit pd suhu 20 - 25◦C atau 5 menit pd suhu 37◦C Baca pada photometer 4010, λ = 546 nm (toleransi 30 menit)

Dasar pengukuran       : End Point

Warna                            : Hijau

Nilai normal                   : 3,8  – 5,1 g/dL

Alb = Abs Test  x  C. std (4 g/dL)

          Abs Std

6. GLOBULIN

Glob = Total protein – Albumi

7. BILIRUBIN TOTAL

Metode      : Jendrassik – Grof

Prinsip        : Bil total dlm serum/plasma ditentukan dg metode Jendrassik-Grof dg diazotized sulfanilic acid setelah penambahan caffeine, sodium benzoate dan sodium acetat. Warna biru azo-bilirubin terbentuk dlm larutan basa fehling II dan dpt diukur dg photometer.

	SB	Sampel
R2 (nitrit)	-	25 µl
R1	100 µl	100 µl
R3	500 µl	500 µl
Serum	100 µl	100 µl
Campur, inkubasi 10 – 60 menit pd 15 - 25◦C
R4	500 µl	500 µl
Campur, inkubasi 5 – 30 menit Baca abs pd photometer 4010, λ = 578 nm, F = 10,5

Dasar pengukuran       : End Point Sampel Blank

Nilai normal                   : 0,1 – 1,2 mg/dL

BT = Abs test x Faktor (10,5)

8. BILIRUBIN DIRECT

Metode      : Jendrassik – Grof

Prinsip        : Bilirubin direct setara dg azo dye merah pd 546 nm menggunakan metode schellong dan wende dg penambahan basa.

	SB	Sampel
R2 (nitrit)	-	25 µl
R1	100 µl	100 µl
NaCl Solution (PZ)	1000 µl	1000 µl
Serum	100 µl	100 µl
Campur, inkubasi 10 – 60 pd 15 - 25◦C Baca abs tepat 5 menit setelah penambahan serum  pd photometer 4010,  λ = 546 nm, F = 14,0

Dasar pengukuran       : End Point Sampel Blank

Nilai normal                   :  ≤ 0,2 mg/dl

BD = Abs test x Faktor (14,0)

9. BILIRUBIN INDIRECT

BI = Bil total – Bil Direct

FRAKSI LIPID

1. CHOLESTEROL

Metode      : CHOD-PAP

Prinsip        : Kolesterol ditentukan setelah hidrolisis enzimatik dan oksidasi indicator quinoimine dibentuk dari hydrogen peroxide 4-aminophenazone dg adanya phenol dan peroxide.

	BL	TEST
Serum	-	10 µl
Reagen	1000 µl	1000 µl
Campur, inkubasi 10 menit pd 20 - 25◦C atau 5 menit pd 37◦C Baca hasil pd photometer 4010,  λ = 546 nm, F = 840, program C/F (toleransi 60 menit)

Dasar pengukuran           : End Point

Warna                                : Orange

Nilai normal                       : 150 – 230 mg/dL

Jika menggunakan abs     ;

Chol = Abs Test  x  C. std (200 mg/dL)

              Abs Std

2. TRIGLISERIDA (TG)

Metode          : GPO-PAP

Prinsip            : TG ditentukan setelah hidrolisis enzimatik dg lipase. Indicator quinoimine dibentuk dari hydrogen peroxide, 4-aminoantipyrine dan 4-cholophenol dibwh katalis peroxidase.

	BL	TEST
Serum	-	10 µl
Reagen	1000 µl	1000 µl
Campur, inkubasi 10 menit pd 20 - 25◦C atau 5 menit pd 37◦C Baca hasil pd photometer 4010,  λ = 546 nm (toleransi 60 menit)

Dasar pengukuran           : End Point

Warna                                : Orange

Nilai normal                       : ≤ 150 mg/dL

TG = Abs Test  x  C. std (200 mg/dL)

      Abs Std

3. HDL CHOL

Metode      : Presipitasi

Prinsip        : Cylomikron, VLDL, LDL diendapkan dg penambahan asam phosphotungstat dan magnesium chloride. Setelah disentifuge, supernatant yg mengandung HDL diperiksa.

	TEST	BL
Sampel (serum)	200 µl	-
Reagen presipitat	500 µl	-
Campur, inkubasi 10 menit pd suhu kamar Sentifuse 4000 rpm selama 15 menit
Aquadest	-	100 µl
Supernatan	100 µl	-
Reagen warna Chol	1000 µl	1000 µl
Campur, inkubasi 10 menit pd 20 - 25◦C atau 5 menit pd 37◦C Baca hasil pd photometer 4010,  λ = 546 nm, F = 320, program C/F (toleransi 60 menit)

Dasar pengukuran           : End Point

Nilai normal                       : L = 35 – 55 mg/dL

                                              P = 45 – 65 mg/dL

C. HDL = 175 mg/dL

4. LDL CHOL

Metode              : dengan rumus

Nilai normal       : suspicious = 150 mg/dL

                              Elevanted = 190 mg/dL

Rumus                :

        LDL = Total Cholesterol – (HDL – TG/5)