PEMERIKSAAN URINE
1. MAKROSKOPIS
-
Warna - Bau
-
Busa - Kejernihan
-
Ph (normal : 5,0 – 7,0)
2. KIMIAWI
a. Albumin
Metode :Test rebus As Asetat 6%
Prinsip : albumin (protein)
akan mengendap pada suasana asam dan panas.
Prosedur :
Ø Urine dihomogenkan à ± 10 ml dituang ke tabung sentifuge
Ø Sentrifuge urine 1500 rpm selama 5
menit à
supernatant dan endapan dipisahkan
Ø Supernatan dituang dlm 2 tabung
reaksi
Tabung
blanko dan tes
Ø Tabung tes dipanaskan sampai mendidih
à bila
terjadi kekeruhan ditambah 2 – 3 tetes asam asetat 6%
Jika
kekeruhan tetap : kekeruhan karena albumin
Jika
kekeruhan hilang : kekeruhan karena fosfat dan karbonat
Metode : Test Asam Sulfosalisilat 20%
Prinsip : Albumin (protein) akan mengendap
dg penambahan asam.
Prosedur :
Ø Urine dihomogenkan à ± 10 ml dituang ke tabung sentifuge
Ø Sentrifuge urine 1500 rpm selama 5
menit à
supernatant dan endapan dipisahkan
Ø Supernatan dituang dlm 2 tabung
reaksi
Tabung
blanko dan tes
Pada tabung
tes ditambah beberapa tetes Asam sulfosalisilat 20% à homogenkan
Bila
terjadi kekeruhan maka urine positif albumin.
Nilai
normal :
(-) Neg : tidak ada kekeruhan
(+) Pos 1 : ada kekeruhan ringan tanpa butir2
(++) Pos 2 : kekeruhan dpt dilihat, ada butir2
(+++) Pos 3 : jelas keruh, kekeruhan berkeping2
(++++) Pos
4 : sangat keruh, berkepingbesar, memadat
b. Reduksi
Metode : Test Benedict
Prinsip : Glukosa akan mereduksi CuSo4
(biru) menjadi oksidasi cupro (merah) dlm keadaan panas.
Prosedur :
Ø Pipet 5 ml pereaksi Benedict,
masukkan tabung reaksi besar
Ø Tambah dg 5 – 8 tetes urine (urine
dihomogenkan dulu)
Ø Dipanaskan à mengamati perubahan yg terjadi
Nilai normal :
(-) Neg : warna biru
(±) Trace : warna hijau
(+) Pos 1 : warna hijau, endapan kuning
(++) Pos 2 : warna kuning sampai hijau tua
(+++) Pos 3 : warna coklat
(++++) Pos
4 : warna jingga sampai merah bata
Metode : Test Fehling
Prinsip : Reduksi larutan tembaga alkali
(biru) menjadi oksidasi cupro (merah) pada suasana panas
Prosedur :
Ø Pipet Fehling A dan Fehling B (1 : 1)
à
dimasukkan dlm tabung reaksi besar
Ø Pipet 0,5 ml urine (urin dihomogenkan
dulu) à
dimasukkan dlm tabung tsb
Ø Tabung dipanaskan sampai mendidih.
Nilai normal :
(-) Neg : warna biru jernih
(+) Pos 1 : warna hijau kekuningan dan keruh
(++) Pos 2 : warna kuning keruh
(+++) Pos 3 : warna jingga keruh
(++++) Pos
4 : warna merah keruh
c. Bilirubin
Metode : Test dari Horrison
Prinsip : Adanya bilirubin dlm urine akan
dioksidasi oleh reagen Fauchet yg berwarna hijau, dimana sebelumnya bilirubin
diendapkan oleh BaCl2.
Prosedur :
Ø Urine dihomogenkan à dipipet 5 ml, masukkan tabung reaksi
Ø Ditambah 2,5 ml larutan BaCl2
10% à
homogenkan
Ø Endapan yg terbentuk disaring dg
kertas saring à kertas saring yg berisi residu dipindahkan ke
petridish
Ø Pada kertas saring ditetesi 1 – 2
tetes pereaksi Fouchet
Nilai normal :
(-) Neg : tidak terjadi perubahan warna pd endapan
(+) Pos : tampak warna hijau pd endapan
d. Urobili
Metode : Test menurut Schlesinger
Prinsip : Iodium mengoksidir urobilinogen
menjadi urobilin yg bereaksi dg ion zink membentuk ikatan komplek yg berpendar
hijau.
Prosedur :
Ø Urine dihomogenkan à dipipet 5 ml à ditambah 3 – 3 tetes lugol
Ø Ditambah 10 ml pereaksi Schlesinger à homogenkan
Ø Larutan disaring à filtrate diamati dg latar belakang
gelap.
Nilai normal :
(-) Neg : warna filtrate kuning jernih
(+) Pos : warna filtrate berpendar hijau
Urobilin (+) belum tentu krn
kelainan, bisa pengaruh obat.
3. SEDIMENT URINE
Metode : Direct
Prinsip : Urine disentrifuge, endapan
dibuat preparat dan dilihat dibawah mikroskop.
Prosedur :
Ø Urin dihomogenkan à dituang ± 10 ml (10 – 15 ml) ke dlm
tabung sentifuge
Ø Urine dusentrifuge 1500 – 2000 rpm
selama 5 menit
Ø Dipisahkan sedimen dari supernatannya
Ø Dibuat preparat
Sediment
dihomogenkan à diambil dg pipet Pasteur à diletakkan pd objek glass à dititip cover glass.
Ø Diamati dg mikroskop perbesaran lensa
objektif 10x (mencari LP dan identifikasi kristal) kemudian 40x (identifikasi).
Jenis
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
|
7
|
8
|
9
|
10
|
Jml
|
Range
|
Eritrosit
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Leukosit
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Epitel
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Kristal
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Silinder
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Lain2
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Bakteri : (+/-)
Yeast :
(+/-)
Parasit : (+/-)
Ca Oksalat Leukosit Hyalin Squamus Epitel
Amorph
Epitel : - Squamust
-
Transisional
(panjang)
-
Renal
(ukuran hamper sama dg leukosit tp lebih besar)
Amorph : Urat dan Phosphat
4. CARIK CELUP
Metode : Carik celup
Prinsip : Urine diperiksa dg menggunakan
reagent strip
Prosedur :
Ø Urin dihomogenkan à dituang ke tabung reasi besar
Ø Carik dicelupkan sebantar à ditiriskan di tepi tabing à ditiriskan pada tissue
Ø Warna dicocokkan dg standart pada
botolnya (1-2 mnt)
CATATAN
Dasar pengukuran photometer 4010
a) End Point
Ciri : - Enzymatic colorimetrik
-
λ
visible,
-
harus
ada Blank, Std, dan Test
-
memerlukan
waktu inkubasi lama
Untuk : Glu, Urea, UA, TP, Alb, Chol,
TG
b) End Point – SB
Blank
berisi sampel (yg membedakan reagen nitrit)
Untuk :
Bilirubin
c) Kinetik
Dibaca
berulang – ulang dan diambil rata –ratanya.
Ciri : - hanya butuh 1 tabung (test)
- Larutan tidak berwarna
- λ UV
- Inkubasi tidak lam, max 1 menit
Untuk : SGOT, SGPT, ALP, LDH, CKMB, γ
GT
d) Fix Time
Disebut
juga Two point kinetic
-
Fix
time
Cara
pembacaan dibaca 2x diambil selisih, λ UV
Untuk :
Urea UV
-
Fix
Time non UV
Λ visible
Untuk :
kreatinin
Pembacaan Bilirubin pada 4010
Program Abs, F = 0, λ disesuaikan
Nyalakan PUM à bilas kuvet dg aquadest à kosongkan
Masukkan SB à takan zero, muncul 0,000 à kosongkan
Bilas aquadest à kosongkan
Masukkan Sampel à tekan result, muncul abs test à kosongkan à bilas aquadest à kosongkan
Program C/F, F = dimasukkan, λ disesuaikan
Masukkan SB à tekan zero, muncul 0,000 à kosongkan
Bilas aquadest à kosongkan
Masukkan sampel à tekan result, muncul Hasil test à Kosongkan à bilas aquadest à kosongkan
Membaca Kreatinin pada 4010
Blank : aquadest
WR + STD/Sample à masuk kuvet à stopwatch nyala à 30 detik tekan zerro, muncul 0,0000 à setelah 2 menit à tekan result, muncul ∆ abs
Panjang gelombang
UV :
340 – 405 nm
Visibel :
492 – 600 nm
Irreversibel :
> 700 nm
GLUKOSA DARAH
METODE : GOD – PAP without deproteinasi
PRINSIP : Gukosa ditetapkan setelah oksidasi
enzimatik menghasilkan glukosa oksidasi. Terbentuk oksigen peroxide bereaksi
dibeh katalis peroxide dg phenol dan 4-aminophenazone berwarna merah ungu
(quinoneimine) sbg indicator.
|
TEST
|
STD
|
BL
|
Serum
|
10 µl
|
-
|
-
|
Std
|
-
|
10 µl
|
-
|
Reagen
warna
|
1000 µl
|
1000 µl
|
1000 µl
|
Campur, inkubasi 10
menit pd suhu 20 - 25◦C atau 5 menit pd suhu 37◦C
Baca pada photometer
4010, λ = 546 nm (toleransi 60 mnit)
|
Reaksi :
Glu + O2 + H2O GOD
Glukonoc acid + H2O2
2H2O2 + 4-aminophnenazone + phenol PAP
quinoneamine + 4H2O
Dasar
pengukuran: End Point
Warna
: pink
Nilai
normal : 75 – 115 mg/dL
Glukosa = Abs Test x C. std (100 mg/dL)
Abs
Std
METODE : GOD – PAP with deproteinasi
|
TEST
|
STD
|
BL
|
Aquadest
|
500 µl
|
500 µl
|
-
|
Std
|
-
|
50 µl
|
-
|
TCA
8 – 10 %
|
500 µl
|
500 µl
|
-
|
Whole
bood (NaF)
|
50 µl
|
|
|
Campur, sentifuge dg
kecepatan 3000 rpm selama 10 menit
|
|||
Supernatan
|
100 µl
|
100 µl
|
|
Reagen
warna
|
1000 µl
|
1000 µl
|
1000 µl
|
Campur, inkubasi 25
menit pd suhu 20 - 25◦C atau 10menit pd suhu 37◦C
Baca pada photometer
4010, λ = 546 nm (toleransi 60 mnit)
|
RENAL FUNGTION TEST (RFT)
1. UREA
Metode : Barthelot
Prinsip : Urea dihidrolisis dlm
campuran air dan urease untuk menghasilkan ammonia dan karbondioksida pd reaksi
modifikasi Barthelot ammonium bereaksi dg hipoklorid dan salisilat untuk
membentuk warna hijau.
|
BL
|
TEST
|
Serum
|
-
|
10 µl
|
Reagen enzim (1 ml enzim + 100 R1)
|
1000 µl
|
1000 µl
|
Campur,
inkubasi 5 mnit pd 20 - 25◦C atau 3
mnit pd 37◦C
|
||
R2
|
1000 µl
|
1000 µl
|
Campur, inkubasi 10 menit pd 25◦C atau 5menit pd 37◦C.
Baca pada photometer 4010, λ = 546 nm, factor = 80
mg/dL (toleransi 60 mnit)
|
Dasar pengukuran : End
Point
Warna :
Hijau
Nilai normal :
Urea = 10 – 50 mg/dL
BUN =
10 – 20 mg/dL
Urea = Abs Test x Faktor
BUN = Urea
2,14
2. ASAM URAT
Metode : PAP
anzymatic colorimetrik
Prinsip :
Pemeriksaan UA dg reaksi uriase. Hydrogen peroxide bereaksi dibwh katalis dari
peroxide dg asam 3,5-dikloro-2-hydrobenzesulfonic (DCHBS) dan 4-amino phenazone
(PA) untuk member warna violet quinoimine sebagai indicator.
|
TEST
|
STD
|
BL
|
Serum
|
20 µl
|
-
|
-
|
Std
|
-
|
20 µl
|
-
|
Reagen
warna
|
1000 µl
|
1000 µl
|
1000 µl
|
Campur, inkubasi 10
menit pd suhu 20 - 25◦C atau 5 menit pd suhu 37◦C
Baca pada photometer
4010, λ = 546 nm (toleransi 15 mnit)
|
Reaksi :
UA + O2 + 2H2O uricase alantoin + CO2 + H2O2
4H2O2 + DCHBS + PAP peroksidase quinoneamine + HCl + 4H2O
Dasar pengukuran : End
Point
Warna :
Pink
NIlai normal :
L = 3,4 – 7,0 mg/dL
P = 2,4 – 6,7 mg/dL
UA = Abs Test x C. std (8 mg/dL)
Abs Std
3. KREATININ
Metode : Jafee
without deproteinasi
Prinsip : Kreatinin
terbentuk dlm larutan bersuasana alkali berwarna merah orange kompleks dg asam
pikrat. Abs kompleks ini sebanding dg konsentrasi kreatinin dlm sampel.
|
STD
|
TEST
|
Serum
|
-
|
100 µl
|
STD
|
100 µl
|
-
|
Working Reagen (WR)
(NaOH encer : asam pikrat à 1:1)
(NaOH enceràNaOH : Aquadest 1:4)
|
1000 µl
|
1000 µl
|
Photometer 4020
Campur, Baca pada photometer 4020, λ = 546 nm.
|
||
Photometer 4010
(program Abs, λ = 546 nm)
Nyalakan stopwatch tepat setelah penambahan sampel
dlm WR, campur dan masukkan ke kuvet photometer 4010
Tepat setelah 30 detik à tekan zero pd photometer 4010.
Stopwatch dilanjutkan sampai 2 menit lg à tekan Result.
Hasil adalah ∆ Abs.
|
Reaksi :
Kreatinin + As pikrat à Kreatinin – pikrat kompleks
Dasar pengukuran : Fix
time non UV
Warna :
Kuning
NIlai normal :
L = 0,6 – 1,1 mg/dL
P = 0,5 – 0,9 mg/dL
Kreat = ∆ Abs test x C.
std (2 mg/dL)
Abs std
LIVER FUNGTION TEST (LFT)
1. SGOT (Serum Glutamic Oksaloasetik Transaminase)
ASAT (Aspartat
Aminotransferase)
Metode : Kinetik
Prinsip : Metode kinetic
untuk determinasi Aspartat Aminotranferase (ASAT) sesuai dg rekomendasi Expert Panel
IFCC tanpa aktivasi pyridoxaphosphate.
|
TEST
|
Serum
|
200 µl
|
Working Reagen (WR)
2 ml Substrat dlm 1 botol Buffer
|
1000 µl
|
Photometer 4020
Pipet 200 µl sampel dan langsung dimasukkan pd
tabung yg sebelumnya sudah berisi 1000 µl WR
Campur, baca pd photometer 4020, λ = 340 nm, F = 952
atau 1745
|
|
Photometer 4010
Campur, inkubasi 1 menit
Baca pd photometer program K20, λ = 340 nm, F = 952
atau 1745
|
Dasar pengukuran : kinetic
Warna :
tidak berwarna
Nilai normal :
|
25◦C (952)
|
30◦C (1746)
|
Laki – laki
|
≥ 18 U/l
|
≥ 25 U/l
|
Perempuan
|
≥ 15 U/l
|
≥ 21 U/l
|
2. SGPT (Serum Glutamic Piruvilic Transaminase)
ALAT (Alanin Aminotransferase)
Metode : Kinetik
Prinsip : Metode kinetic
untuk determinasi Alanin Aminotranferase (ALAT) sesuai dg rekomendasi Expert
Panel IFCC tanpa aktivasi pyridoxaphosphate.
|
TEST
|
Serum
|
200 µl
|
Working Reagen (WR)
2 ml Substrat dlm 1 botol Buffer
|
1000 µl
|
Photometer 4020
Pipet 200 µl sampel dan langsung dimasukkan pd
tabung yg sebelumnya sudah berisi 1000 µl WR
Campur, baca pd photometer 4020, λ = 340 nm, F = 952
atau 1745
|
|
Photometer 4010
Campur, inkubasi 1 menit
Baca pd photometer program K20, λ = 340 nm, F = 952
atau 1745
|
Dasar pengukuran : kinetic
Warna :
tidak berwarna
Nilai normal :
|
25◦C (952)
|
30◦C (1746)
|
Laki – laki
|
≥ 22 U/l
|
≥ 30 U/l
|
Perempuan
|
≥ 17 U/l
|
≥ 23 U/l
|
3. ALP (Alkali Phosphatase)
Metode :
Kinetik
|
TEST
|
Serum
|
20 µl
|
Working Reagen (WR)
2 ml Substrat dlm 1 botol Buffer
|
1000 µl
|
Campur, inkubasi 1 menit
Baca pd photometer 4010 program K20, λ = 340 nm, F =
2757
|
Dasar pengukuran : kinetic
Warna : tidak berwarna
Nilai normal :
|
25◦C (952)
|
30◦C (1746)
|
Laki – laki
|
50 – 190 U/l
|
61 - 232 U/l
|
Perempuan
|
40 - 190 U/l
|
49 - 232 U/l
|
4. Total Protein
Metode : Biuret
Prinsip : Ion cupri bereaksi
dg protein dlm larutan alkali membentuk kompleks warna ungu.
|
TEST
|
STD
|
BL
|
Serum
|
20 µl
|
-
|
-
|
Std
|
-
|
20 µl
|
-
|
Reagen
warna
|
1000 µl
|
1000 µl
|
1000 µl
|
Campur, inkubasi 10
menit pd suhu 20 - 25◦C atau 5 menit pd suhu 37◦C
Baca pada photometer
4010, λ = 546 nm (toleransi 30 menit)
|
Dasar pengukuran : End Point
Warna :
Ungu (std : biru)
Nilai normal : 6,6
– 8,7 g/dL
TP = Abs Test x C. std (8 g/dL)
Abs Std
5. ALBUMIN
Metode : Bromcresol Green (BCG)
Prinsip : BCG dg albumin dlm buffer citrate
membentuk warna kompleks.
|
TEST
|
STD
|
BL
|
Serum
|
10 µl
|
-
|
-
|
Std
|
-
|
10 µl
|
-
|
Reagen
warna
|
1000 µl
|
1000 µl
|
1000 µl
|
Campur, inkubasi 10
menit pd suhu 20 - 25◦C atau 5 menit pd suhu 37◦C
Baca pada photometer
4010, λ = 546 nm (toleransi 30 menit)
|
Dasar pengukuran : End Point
Warna :
Hijau
Nilai normal :
3,8 – 5,1 g/dL
Alb = Abs Test x C. std (4 g/dL)
Abs Std
6. GLOBULIN
Glob = Total protein – Albumi
7. BILIRUBIN TOTAL
Metode : Jendrassik – Grof
Prinsip : Bil total dlm
serum/plasma ditentukan dg metode Jendrassik-Grof dg diazotized sulfanilic acid
setelah penambahan caffeine, sodium benzoate dan sodium acetat. Warna biru
azo-bilirubin terbentuk dlm larutan basa fehling II dan dpt diukur dg
photometer.
|
SB
|
Sampel
|
R2 (nitrit)
|
-
|
25 µl
|
R1
|
100 µl
|
100 µl
|
R3
|
500 µl
|
500 µl
|
Serum
|
100 µl
|
100 µl
|
Campur,
inkubasi 10 – 60 menit pd 15 - 25◦C
|
||
R4
|
500 µl
|
500 µl
|
Campur, inkubasi 5 – 30 menit
Baca abs pd photometer 4010, λ = 578 nm, F = 10,5
|
Dasar pengukuran : End Point
Sampel Blank
Nilai normal : 0,1
– 1,2 mg/dL
BT = Abs test x Faktor (10,5)
8. BILIRUBIN DIRECT
Metode : Jendrassik – Grof
Prinsip : Bilirubin direct setara dg azo dye merah pd 546 nm
menggunakan metode schellong dan wende dg penambahan basa.
|
SB
|
Sampel
|
R2 (nitrit)
|
-
|
25 µl
|
R1
|
100 µl
|
100 µl
|
NaCl Solution (PZ)
|
1000 µl
|
1000 µl
|
Serum
|
100 µl
|
100 µl
|
Campur, inkubasi 10 – 60 pd 15 - 25◦C
Baca abs tepat 5 menit setelah penambahan serum pd photometer 4010, λ = 546 nm, F = 14,0
|
Dasar pengukuran : End Point
Sampel Blank
Nilai normal : ≤ 0,2 mg/dl
BD = Abs test x Faktor (14,0)
9. BILIRUBIN INDIRECT
BI = Bil total – Bil Direct
FRAKSI LIPID
1. CHOLESTEROL
Metode : CHOD-PAP
Prinsip : Kolesterol
ditentukan setelah hidrolisis enzimatik dan oksidasi indicator quinoimine
dibentuk dari hydrogen peroxide 4-aminophenazone dg adanya phenol dan peroxide.
|
BL
|
TEST
|
Serum
|
-
|
10 µl
|
Reagen
|
1000 µl
|
1000 µl
|
Campur, inkubasi 10 menit pd 20 - 25◦C atau 5 menit pd 37◦C
Baca hasil pd photometer 4010, λ = 546 nm, F = 840, program C/F (toleransi
60 menit)
|
Dasar pengukuran : End
Point
Warna :
Orange
Nilai normal :
150 – 230 mg/dL
Jika menggunakan abs ;
Chol = Abs Test x C. std (200 mg/dL)
Abs Std
2. TRIGLISERIDA (TG)
Metode : GPO-PAP
Prinsip : TG ditentukan
setelah hidrolisis enzimatik dg lipase. Indicator quinoimine dibentuk dari
hydrogen peroxide, 4-aminoantipyrine dan 4-cholophenol dibwh katalis
peroxidase.
|
BL
|
TEST
|
Serum
|
-
|
10 µl
|
Reagen
|
1000 µl
|
1000 µl
|
Campur, inkubasi 10 menit pd 20 - 25◦C atau 5 menit pd 37◦C
Baca hasil pd photometer 4010, λ = 546 nm (toleransi 60 menit)
|
Dasar pengukuran : End
Point
Warna :
Orange
Nilai normal :
≤ 150 mg/dL
TG = Abs Test x C. std (200 mg/dL)
Abs Std
3. HDL CHOL
Metode : Presipitasi
Prinsip : Cylomikron, VLDL, LDL diendapkan dg penambahan asam
phosphotungstat dan magnesium chloride. Setelah disentifuge, supernatant yg
mengandung HDL diperiksa.
|
TEST
|
BL
|
Sampel (serum)
|
200 µl
|
-
|
Reagen presipitat
|
500 µl
|
-
|
Campur, inkubasi 10 menit pd suhu kamar
Sentifuse 4000 rpm selama 15 menit
|
||
Aquadest
|
-
|
100 µl
|
Supernatan
|
100 µl
|
-
|
Reagen warna Chol
|
1000 µl
|
1000 µl
|
Campur, inkubasi 10 menit pd 20 - 25◦C atau 5 menit pd 37◦C
Baca hasil pd photometer 4010, λ = 546 nm, F = 320, program C/F (toleransi
60 menit)
|
Dasar pengukuran : End
Point
Nilai normal :
L = 35 – 55 mg/dL
P = 45 – 65 mg/dL
C. HDL = 175 mg/dL
4. LDL CHOL
Metode : dengan rumus
Nilai normal : suspicious =
150 mg/dL
Elevanted = 190 mg/dL
Rumus :
LDL = Total Cholesterol – (HDL – TG/5)
Tidak ada komentar:
Posting Komentar